გლუკოზა ოქსიდაზა გლუკოზის განსაზღვრის მეთოდი

მეთოდის პრინციპი. მეთოდი ემყარება გლუკოზის ოქსიდაზას ფერმენტის მოქმედების სპეციფიკას. ეს ფერმენტი გლუკოზას ჟანგავს, მოლეკულური ჟანგბადის თანდასწრებით, გლუკონოლაქტონის შესაქმნელად, რომელიც სპონტანურად ატენიანებს გლუკონური მჟავას. გლუკოზა ოქსიდაზა ჟანგავს გლუკოზას წყალბადის ზეჟანგით (H₂ოჰ₂), რომელიც რეაგირებს 4-ამინოანტიპრინთან და ფენოლთან ერთად პეროქსიდაზას მოქმედებით. შედეგად, იქმნება ვარდისფერი ფერის ნაერთი, რომლის ოპტიკური სიმკვრივე 510 ნმ-ზე არის პროპორციული სინჯში გლუკოზის კონცენტრაციის შესაბამისად.

გლუკოზა + O₂ + თ₂ოჰ გლუკონური მჟავა + H₂ოჰ₂

2 ნ₂ოჰ₂ + 4-ამინოანტიპრინი + ფენოლი კვინონიმი + 4H₂ოჰ

აპარატურა CPK, ცენტრიფუგა, თერმოსტატი, თაროები, ტესტის მილები, პიპეტები, ბიოლოგიური მასალა, რეაგენტები, რომლებიც შეიცავს სამუშაო ხსნარში.

ექსპერიმენტული ნიმუში, მლ

სტანდარტული ნიმუში, მლ

უმოქმედო ტესტი (N₂პ), მლ

გლუკოზის კალიბრაციის ხსნარი (ცნობა)

მილები შეჰყავთ თერმოსტატში 37 ° C ტემპერატურაზე 15 წუთის განმავლობაში, შემდეგ კი ფერმენტდება CPC- სთან მწვანე ფილტრით კუბიკებში, ფენის სისქე 5 მმ ცარიელი ნიმუშის საწინააღმდეგოდ (N₂პ). ვარდისფერი ფერი სტაბილურია ინკუბაციიდან 1 საათის განმავლობაში.

გაანგარიშება გლუკოზის შემცველობა წარმოიქმნება ფორმულით:

გ =x C სტანდარტი სად

C არის გლუკოზის შემცველობა ექსპერიმენტულ ნიმუშში, მოლ / ლ,

ეპ - ნიმუშის ოპტიკური სიმკვრივე,

ჭამს - კალიბრის ნიმუშის ოპტიკური სიმკვრივე,

C სტანდარტი - შინაარსი კალიბრაციის ხსნარში, მოლ / ლ.

ნორმალური მნიშვნელობები:  ახალშობილები - 2.8-4.4 მმოლ / ლ

 ბავშვები - 3.9 -5.8 მმოლ / ლ

 მოზრდილებში - 3.9 - 6.2 მმოლ / ლ

ჰიპოგლიკემია (GHC).სისხლში გლუკოზის მომატება მრავალი მიზეზის გამო ხდება, რომლის მიხედვითაც ჰიპერგლიკემიის ორი ჯგუფი გამოირჩევა.

1. იზოლატორი - ასოცირდება ორგანიზმში არასაკმარისი ინსულინთან ან მისი მოქმედების არაეფექტურობის გამო.

2. ექსტრაინულარული (ექსტრავენკულარული) - არ არის დამოკიდებული ინსულინის გავლენაზე.

შემდეგი პროცესები ყველაზე მნიშვნელოვანია HHC- ების წარმოქმნაში: გლიკოგენების გაფუჭების მომატება, გაზრდილი ნეოგლუქოგენეზი, გლიკოგენების სინთეზის ინჰიბირება, ქსოვილის გლუკოზის ათვისების შემცირება ჰორმონალური ინსულინის ანტაგონისტების გავლენის ქვეშ: სომატოტროპინი, გლუკოკორტიკოიდები, თიროქსინი, თიროტროპინი.

ალიმენტური ჰიპერგლიკემია აღინიშნება სისხლში გლუკოზის ჭარბი მიღებით (მაგალითად, ჰიპერგლიკემია შაქრის დატვირთვით). "ღვიძლის" ჰიპერგლიკემია გვხვდება ღვიძლის დიფუზური დაზიანებით.

მუდმივი და მძიმე ჰიპერგლიკემია ყველაზე ხშირად თან ახლავს დიაბეტს. ჩვეულებრივ იზოლირდება შაქრიანი დიაბეტი და ინსულინდამოკიდებული შაქრიანი დიაბეტი, ან, შესაბამისად, I ტიპის დიაბეტი და II ტიპის შაქრიანი დიაბეტი. I ტიპის დიაბეტის წარმოქმნა ძირითადად ასოცირდება ინსულინის დაქვეითებულ სინთეზთან და მეტაბოლიზმთან.

ჰიპერგლიკემიის მეორე ჯგუფი, პირველ რიგში, ასოცირდება ენდოკრინული ჯირკვლების მწარმოებელ ენდოკრინული ჯირკვლების ჰიპერფუნქციასთან - ინსულინის ანტაგონისტებთან. აღინიშნება ისეთ დაავადებებში, როგორებიცაა იშენკო-კუშინგის სინდრომი და დაავადება, აკრომეგალია, თირეოტოქსიკოზი, ფოქრომოციტომა, გლუკოგანომა. სისხლში გლუკოზის დონე მატულობს ღვიძლის გარკვეულ დაავადებებთან (კერძოდ, ღვიძლის ციროზით დაავადებულ პაციენტთა 10-30% -ში), ჰემოქრომატოზით (ღვიძლის პიგმენტური ციროზით, ბრინჯაოს დიაბეტით).

ჰიპოგლიკემია (GPG) - სისხლში გლუკოზის დაქვეითება - ყველაზე ხშირად ასოცირდება სისხლში ინსულინის დონის აბსოლუტურ ან ფარდულ ზრდასთან. ექსტრაბანკრეკული ჰიპოგლიკემია აღინიშნება ღვიძლში გლიკოგენოლიზის პროცესებისა და გლიკონეოგენეზის პროცესების სიმძიმეს შორის დისბალანსის მხრივ, მწვავე და ქრონიკული ჰეპატიტების, ციროზის, ღვიძლის მწვავე და ქვემწვავე დისტროფიის, ალკოჰოლური ინტოქსიკაციის, დარიშხანის დარიშხანებით, ღვიძლის გახანგრძლივებული ობსტრუქციული სიყვითლით, ღვიძლის ღრუს პროტეზული სიყვითლეებით . სისხლში გლუკოზის კონცენტრაციის დაქვეითება ხშირად აღინიშნება პაციენტებში, რომლებსაც განიცდიან საყლაპავის კიბო და სხვა პანკრეასის ლოკალიზაციის სხვა ავთვისებიანი სიმსივნეები (ფიბრომა, ფიბროსარკომა, ნევრომა), აგრეთვე დაუოკებელი პირღებინება, ანორექსია, ღვიძლის დიაბეტი, ურემიის, პროფიქტიკური ლაქტაცია და გლუკოზურია ორსულებში.

ჰიპოგლიკემია შეიძლება იყოს ცენტრალური წარმოშობის გამო ფსიქიური ტრავმის, ენცეფალიტის, სუბარაქნოიდული სისხლდენის, ტვინის სიმსივნის გამო.

1. ნახშირწყლების მონელების მემკვიდრეობითი დარღვევები.

2. ჰიპერგლუკოზიემიის რა ტიპები ცნობილია თქვენთვის?

3. რა არის პათოლოგიური ჰიპერგლუკოზიემიის მიზეზები?

4. რა არის ინსულინდამოკიდებული შაქრიანი დიაბეტის მიზეზი?

5. რა არის მემკვიდრეობითი დაავადებების ბიოქიმიური მიზეზები: ა) გლიკოგენოზი? ბ) აგლიკოგენოზი? გ) ფრუქტოზემია? დ) გალაქტოზემია?

6. რა არის ბიოქიმიური ცვლილებები ნახშირწყლების მეტაბოლიზმში მარხვის დროს?

7. გლუკოზის ტოლერანტობის განსაზღვრის მეთოდის პრინციპი.

როდის არის დადგენილი გლუკოზა ოქსიდაზას მეთოდი?

ეს ტესტი გამოიყენება შაქრიანი ტოლერანტობის დასადგენად და პრედიაბეტების განვითარების, აგრეთვე დაავადების სიმაღლეზე. მაგრამ ამ მიზნებისათვის ანალიზს იშვიათად იყენებენ, ეს გამოწვეულია მისი მაღალი ხარჯებით და შედეგის ხანგრძლივი მოლოდინით. ყველაზე ხშირად, გლუკოზის განსაზღვრა სისხლში და შარდში ამ მეთოდის გამოყენებით გამოიყენება დაავადებების დიფერენციალური დიაგნოზი, როგორიცაა:

შაქარი დაუყოვნებლად მცირდება! დროთა განმავლობაში დიაბეტით დაავადებამ შეიძლება გამოიწვიოს მთელი რიგი დაავადებები, მაგალითად, მხედველობის პრობლემები, კანისა და თმის მდგომარეობა, წყლულები, განგრენა და კიბო კიბოებიც კი! ხალხმა მწარე გამოცდილება ასწავლა შაქრის დონის ნორმალიზებისთვის. წაიკითხეთ

• ლაქტოზის შეუწყნარებლობის სინდრომი,
• ფრუქტოზის შეუწყნარებლობა,
• ფრუქტოზის სეკრეცია სხეულის სითხეებით,
• შარდში პენტოზის გაზრდილი კონცენტრაცია.

გლუკოზის ოქსიდაზას ტესტის უდავო უპირატესობა მისი სიზუსტეა.

რა არის ამ მეთოდის საფუძველი?

სისხლში გლუკოზის კონცენტრაციის განსაზღვრის სხვადასხვა მეთოდი არსებობს, მაგრამ გლუკოზის ოქსიდაზა ყველაზე ზუსტია. იგი გამომდინარეობს იქიდან, რომ ატმოსფერულ ჟანგბადთან შაქრის ურთიერთქმედების დროს რეაგენტი ჟანგდება. წყალბადის ზეჟანგი იხსნება ხსნარში. ეს ნივთიერება ურთიერთქმედებს ორთოტოლიდინთან, რათა შექმნას ფერადი ნაერთი. ამ რეაქციის ქცევისთვის აუცილებელია სპეციალური ფერმენტების არსებობა. ჟანგვის რეაქციის დროს, გლუკოზის ოქსიდაზა უნდა იყოს, ხოლო თხევადი შეღებვისას, პეროქსიდაზა უნდა იყოს. ხსნარის ფერის ინტენსივობა დამოკიდებული იქნება გლუკოზის შემცველობაზე და ყველაზე ინტენსიური იქნება მისი მაღალი შემცველობით.

გლუკოზის ოქსიდაზა გლუკოზის განსაზღვრის არსი

შედეგის შეფასება ხდება ფოტომეტრიის რაოდენობრივი მეთოდის გამოყენებით, იმავე პერიოდის შემდეგ. სავალდებულოა გამოიყენოთ კალიბრაციის ხსნარი, რომელიც შეიცავს გარკვეულ დეკლარირებულ შაქრის ნორმას და, აქედან გამომდინარე, თქვენ შეგიძლიათ განსაჯოთ გლუკოზის კონცენტრაცია სხეულის სითხეებში, ხშირად სისხლში.

როგორ ხორციელდება ანალიზი?

მასალის მიღება პაციენტისგან ცარიელ კუჭზე აქვს. ტესტისთვის გამოიყენება ვენური სისხლი 5 მლ ოდენობით. დიაგნოზის წინა დღეს პაციენტს ნაჩვენებია მკაცრი დიეტა. ეს შესაძლებელს გახდის ვიმსჯელოთ შედეგის საიმედოობაზე და გამორიცხეთ ანალიზის შესაძლო შეცდომები. სისხლის მიღებამდე 2 დღით ადრე პაციენტმა უნდა უარი თქვას ალკოჰოლის დალევისა და მოწევის ცუდი ჩვევები. ასევე აუცილებელია შეზღუდოს ზედმეტად ტკბილი საკვების მიღება და შეძლებისდაგვარად თავიდან ავიცილოთ სტრესული სიტუაციები.

შაქრით პლაზმური მოპოვების მიზნით, სისხლი ხდება ცენტრიფუგით.

ყველაზე ხშირად, გლუკოზის კონცენტრაციის განსაზღვრის ეს მეთოდი ხორციელდება ცენტრიფუგირებით, რომელთა ფორმირების ელემენტები იზოლირებულია. შაქრის ოდენობა უკვე დადგენილია პლაზმაში. როდესაც მას ემატება ყველა საჭირო რეაგენტი, ფერი შეინიშნება 20 წუთის შემდეგ, თუ ტესტის ჩატარება ხდება ოთახის ტემპერატურაზე. გლუკოზის გაანგარიშება ხორციელდება კალიბრაციის გრაფიკის შესაბამისად, ან მსახურების წესის გამოყენებით.

კვლევის რეაგენტები

შაქრის დასადგენად ყველაზე მოსახერხებელია სისხლში გლუკოზის განსაზღვრისთვის ექსპრეს მეთოდების გამოყენება. ეს გამოწვეულია გამოყენების მარტივად და სწრაფი შედეგებით. გარდა ამისა, პაციენტს არ სჭირდება ლაბორატორიაში ან საავადმყოფოში წასვლა. მაგრამ გლუკოზის ოქსიდაზას ტესტისგან განსხვავებით, ასეთი დიაგნოზი არასანდოა. ვინაიდან ის არ განასხვავებს გლუკოზას სხვა შაქრისგან და განსაზღვრავს მათ კონცენტრაციას ერთად.

გლუკოზის ოქსიდაზას რეაქციის საფუძველია ნატრიუმის ქლორიდის 9% -იანი ხსნარი და თუთიის სულფატი 50%. მათ ემატება სისხლის ცენტრიფუგირების ეტაპზე. გარდა ამისა, გამოიყენება ბუფერული ხსნარი ძმარმჟავასთან და ნატრიუმის აცეტატთან ერთად. ტიტრაციის მეთოდი განსაზღვრავს მის pH- ს 4.8-ზე. ამის შემდეგ, გლუკოზის ოქსიდაზა ემატება, რის გამო იხსნება წყალბადის ზეჟანგი და პეროქსიდაზა, რომელიც მონაწილეობს ზუსტი შედეგის მისაღებად სასურველი კონცენტრაციის ხსნარის შეღებვაში.

ნორმები ანალიზში

შაქრის გაზომვა ხდება სპეციალურ დანაყოფებში - მილიმეტრები თითო ლიტრი ხსნარისთვის.

გლუკოზის ოქსიდაზას სისხლის ტესტი სავალდებულოა ცარიელ კუჭზე და ამისათვის გამოიყენოთ პლაზმური ან შრატში. ზრდასრულთათვის მისი რაოდენობის ნორმა როგორც ქალებისთვის, ასევე მამაკაცებისთვის არის 3.3-5.5. 15 წელზე უფროსი ასაკის ბავშვებისთვის ეს მაჩვენებელი ოდნავ დაბალია და 3.2-5.3-ით მერყეობს. ახალშობილებში სისხლში გლუკოზა არის 1.7-4.2. ინდიკატორების ზრდა აღინიშნება პაციენტში შაქრიანი დიაბეტის განვითარებით ან გლუკოზის ტოლერანტობის დარღვევით. ეს მდგომარეობა არის prediabetes, და თუ დროულად არ დარჩება მკურნალობა, ის მალე ამ მძიმე პათოლოგიის განვითარებამდე მიგვიყვანს.

ჯერ კიდევ შეუძლებელია დიაბეტის განკურნება?

ვიმსჯელებთ იმით, რომ ახლა ამ სტრიქონებს კითხულობთ, სისხლში მაღალი შაქრის წინააღმდეგ ბრძოლაში გამარჯვება ჯერჯერობით თქვენს მხარეს არ არის.

და უკვე გიფიქრიათ საავადმყოფო მკურნალობაზე? გასაგებია, რადგან დიაბეტი ძალიან საშიში დაავადებაა, რომელიც, თუ არ მკურნალობა, შეიძლება გამოიწვიოს სიკვდილი. მუდმივი წყურვილი, სწრაფი შარდვა, ბუნდოვანი ხედვა. ყველა ეს სიმპტომი შენთვის ნაცნობია.

მაგრამ შესაძლებელია თუ არა მიზეზზე მკურნალობა, ვიდრე ეფექტი? ჩვენ გირჩევთ სტატიის წაკითხვას დიაბეტის მიმდინარე მკურნალობის შესახებ. წაიკითხეთ სტატია >>